فایل بررسی افزایش میزان میکرو RNAی21 (miR-21) در سرم بیماران مبتلا به آدنوکارسینومای معده
دسته بندي :
کالاهای دیجیتال »
رشته پزشکی (آموزش_و_پژوهش)
این پایان نامه در قالب فرمت word قابل ویرایش ، آماده پرینت و ارائه به عنوان پروژه پایانی میباشد
مقدمه: میکروRNA ها گروه جدیدی از RNA های تنظیمی هستند که حدود 22 نوکلئوتید طول دارند. همچنین میکروRNA ها در بسیاری از سرطان های انسانی نقش دارند، و ظاهرا هم به عنوان انکوژن و هم به عنوان سرکوبگر تومور عمل می کنند. در این بررسی ارتباط بین میزان mir-21 در سرم افراد بیمار و سالم و ارتباط بیان بالای این میکروRNA با مرحله بندی تومور و پیشرفت سرطان برای اولین بار در ایران بر روی سرطان آدنوکارسینومای معده انجام گرفت.
روش کار: در این مطالعه بر روی 40 بیمار مبتلا به سرطان آدنوکارسینومای معده و 40 بیمار که بعلت ناراحتی گوارشی مراجعه کرده اند ولی بعد از تشخیص سالم و یا غیر سرطانی بوده اند نیز بعنوان گروه شاهد انتخاب گردیدند میزان miR-21 سرم آنها با استفاده از تکنیک Real-Time PCR اندازه گیری گردید وارتباط بین بیان این میکرو RNA با مرحله بندی تومور و پیشرفت سرطان مورد ارزیابی قرار گرفت.
نتایج: افزایش بیان mir-21 در نمونه‌های سرمی، میزان miR-21 سرم در بیماران حدود 5/3 برابر افراد کنترل بود ( 0001/0 p< ) ، میزان miR-21 سرم در بیماران ارتباط معنی داری با مرحله بندی تومور نشان داد (01/0p< ،56/0 =τ)، نشانگر ارتباط معنی‌دار و مستقیم mir-21 با افزایش اندازه تومور میباشد که بیانگر اهمیت این میکروRNA در پیشرفت سرطان معده است.
نتیجه‌گیری: با توجه به نقش mir-21 در پیشرفت سرطان معده و سرطان‌های مختلف و با توجه به ارتباط آن با فاکتورهای کلینیکوپاتولوژیکی، می‌توان آن را به عنوان مارکر تشخیصی جدید و به عنوان یک روش غیر تهاجمی در تشخیص زود هنگام بیماران سرطان آدنوکارسینومای معده معرفی کرد. در این بررسی، mir-21 نقش انکوژنی دارد که با سنجش میزان آن در سرم بیماران می‌توان پیشرفت سرطان معده را بررسی کرد. سرطان نتيجه خروج سلول ها از مسيرهاى درست تنظيمى، تكثيري، و تمايزی است. خودكارآمدی در سيگنال هاى رشد، غيرحساس شدن به سيگنال هاى مهاركننده رشد، اجتناب از مرگ سلولى برنامه ريزى شده، پتانسيل نامحدود تكثير، حفظ رگ زايى و تهاجم بافتى و متاستاز منجر به بدخيم شدن سرطان مي شوند. برهمکنش میکرو RNA ها با ژن های هدف، نقش آنها را در رشد، مرگ برنامه ریزی شده، تمایز و تکثیر سلولی مشخص کرده و عملکرد مستقیم میکرو RNA را در سرطان تایید میکند. می توان از بیان میکرو RNA های غالب برای طبقه بندی سرطانها در گروههایی با ويژگى هاى متفاوت مثل نوع سلول و سبب شناسى استفاده كرد. استفاده از میکرو RNA برای طبقه بندی تومور به مراتب مناسب تر از mRNA مى باشد،اين امر به علت جفت شدگي ناقص بين ميكرو RNA و mRNA هاي هدف است، از اين رو ريز سنج هاي ميكرو RNA میتوانند بيان چند صد ژن و در نتيجه مسير هاي متعدد را در يك نمونه شناسايي كنند، در حالي كه تنها به مقادير كمي از RNA کل نیاز دارند. ساختار میکرو RNA ها و نحوه عملکرد آنها نشان میدهد که بسیاری از میکرو RNA ها در نمونه های سرطانی به صورت غیر طبیعی بیان میشوند. علاوه بر اين، تفاوت هاى عملكردى بين انواع تومورها و مراحل مختلف سرطان با بيان ميكروRNA ها مرتبط است. بیان میکروRNA با ويژگى هاى بالينى و زيستي تومور از قبيل نوع بافت، تمايز، تهاجم و پاسخ به درمان مرتبط است. استفاده از میکرو RNA ها به عنوان نشان گرهاى تشخيصى از طريق بررسى سرم يا پلاسماى انسانى امكان پذير است، از اين رو مى توان ميكروRNA های سرطانی و سلول هاي توموري موجود در سرم يا پلاسما را بدون هيچ گونه روش تهاجمي شناسايى كرد. به استثناى لوسمى ها كه سلول هاى بدخيم به آسانى در دسترس هستند. برای سرطان هاى جامد، نمونه برداري بافت از طريق بيوپسى يا جراحي انجام مي گيرد، و چون معمولاً جراحى زمانى صورت مى گيرد كه سرطان به ميزان قابل توجهي پيشرفت نموده، تشخيص آن چندان مفید نمیباشد. در این موارد استفاده از میکرو RNA ها یی که با فنوتيپ هاى بدخيم ارتباط تنگاتنگ دارند به عنوان نشان گرهاى تشخيصى جهت تشخيص بيماري در مراحل آغازين آن بسيار کمک کننده است. با در نظر گرفتن اين واقعيت كه اغلب روش هاى رايج براى غربال گرى سرطان در مراحل اوليه قادر به تشخيص بيمارى نمى باشند، شناسايى میکرو RNA های توموری که طی پیشرفت تدریجی بیماری در جریان خون منتشر میشوند، روش کلیدی در تشخیص به موقع سرطان محسوب میشود. فرضیه‌ها 9
چکیده 11
فصل اول: کلیات تحقیق
1-1- مقدمه 12
1-1- آشنایی با سرطان 14
1-2- سرطان معده 15
1-2-1- نشانه ها و علائم سرطان معده 15
1-2-2- دلایل ابتلا به سرطان معده 17
1-2-3- توزیع جغرافیایی سرطان معده در جهان و ایران 19
1-2-4- مرگ و میر 21
1-2-5- تعیین مراحل بیماری 22
1-2-6- سیر بالینی بیماری 24
1-2-7- ارتباط سرطان معده و میکرو RNA 25
فصل دوم: مروری بر تحقیقات انجام شده 31
فصل سوم: مواد و روش‌ها
3-1-1 مقدمهReal Time PCR 34
3-1-2 انواع تکنیک های Real-Time PCR 35
3-1-3 آنالیزهای کمی در Real time PCR 36
3-1-4 مزایای Sybr Green Real Time PCR 36
3-1-5 منحنی ذوب 37
3-1-6 اصطلاحات موجود در Real time PCR 38
3-2 روش کار 38
3-2-1 مرحله اول: انتخاب بیمار 39
3-2-2مرحله دوم: تهیه سرم از بیمار 39
3-2-3 مرحله سوم: استخراج RNA از سرم 39
3-2-4 آماده سازی محلول های لازم برای کیت استخراج RNA از سرم 40
3-2-5 ارزیابی بازده و کیفیت RNA ی جدا شده 41
3-2-6 واکنش رونویسی معکوس 43
3-2-7 انجام واکنش Real Time PCR 44
3-2-8 تعیین سیگنال پایه 54
3-2-8 تعیین سیکل آستانه 54
3-2-8 آنالیز منحنی ذوب 46
3-3-1 محاسبه میزان miRNA-21 نمونه های تحت مطالعه 47
3-3-2 آنالیز آماری داده ها 48
فصل چهارم: نتایج
4-1 خصوصیات بیماران و ویژگی‌های پاتولوژیکی آنها 49
4-2 وضعیت بیان مارکر miRNA-21 و ارتباط آن با فاکتورهای پاتولوژیکی 50
فصل پنجم: بحث و نتیجه‌گیری
5-1- بحث 55
5-2- نتیجه‌گیری 61
منابع 62
چکیده انگلیسی 68
فهرست شکل ها
عنوان صفحه
شکل1-1لایه های دیواره معده 16
شکل 1-2 میزان پراکندگی سرطان معده در ایران 21
شکل 1-3 پردازش میکروRNA 27
شکل3-1 باند در ژ الکتروفورز 42
شکل3-2 تنظیم دمائی Real-Time PCR 45
شکل4-1 مقادیر miR-21 در سرم بیماران و افراد کنترل 51
شکل4-2 مقادیر miR-21 در سرم بیماران 52
شکل4-3 منحنی راک 54
فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار 3-1 نمودار شدت فلوئورسانس 46
فهرست جدول‌ها
عنوان صفحه
جدول4-1خصوصیات بالینی و دموگرافیک افراد تحت مطالعه 50
جدول 4-2 آنالیز رگرسیون خطی که برای دیگر متغییرهای زمینه ای کنترل شده 53